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ELISA試劑盒的標本收集及保存方法
點擊次數(shù)：3027 日期：2014/7/11 11:13:54
ELISA試劑盒的標本收集及保存方法
利用ELISA進行臨床檢驗常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。
A、血液樣本
有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應在標本上注明該因素。
1．外周血
一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對燒傷病人，可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規(guī)檢測（如白細胞計數(shù)、分類等）受生理因素影響波動過大，比較時宜使條件盡量一致。涉及到體內(nèi)出、凝血功能的檢測項目（如血小板計數(shù)，出血時間或凝血時間等）的檢測，一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物，以便在減少或避免干擾因素的影響。
2．靜脈血
除涉及各種止血和血栓檢測等項目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數(shù)檢測項目的分析檢測可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測項目中，有些（如血糖，血脂等）受飲食及晝夜因素影響較大，一般以清晨空腹血標本為宜；有些在血中衰變較快（血清酶活性測定如ACP活性等），0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項目的檢測必須及時而快速；有些（如肌酸激酶等）受運動等因素影響較大。抽血時避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀，LDH等的測定。
B、尿液樣本
同血標本一樣，尿液標本受飲食、運動、藥物量等因素的影響也較大，特別是飲食的影響，故一般來說晨尿優(yōu)于隨機尿。晨尿是指清晨起床后的第一次尿標本，較濃縮和酸化，有形成分（如血細胞，上皮細胞，管形）相對集中便于觀察。隨機尿即隨意一次尿，留取方便，但受飲食、運動、藥物影響較甚，易于出現(xiàn)假陽性和假陰性結果，如飲食性蛋白尿，飲食性糖尿，維生素C干擾潛血結果等。餐后尿（午餐后2小時收集的患者尿液）適用于尿糖，尿蛋白和尿膽原的檢查，此時的尿標本可增加試驗敏感性，檢出較輕微的病變。12小時尿細胞計數(shù)即Addis計數(shù)（前晚8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液），因時間較長，細菌易繁殖，須加入防腐劑甲醛。24小時尿（第一天晨8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液）中化學物質(zhì)的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羥類固醇，兒茶酚胺，Ca2+等，檢測不同的物質(zhì)，選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細菌培養(yǎng)，要求無菌，沖洗外陰后留取標本。所有尿標本的收集都應足量，*少12 ml，*好50 ml，定時尿須全部收集，對女性患者應避免陰道分泌物、經(jīng)血污染尿標本。
C、糞便樣本
糞便標本的檢測對判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價值。采集時要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便，對外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計數(shù)應收集24小時糞便。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應于排便后立即檢查，從有膿血和稀軟處取材，保溫送檢。查日本血吸蟲蟲卵時應取粘液、膿血部分，孵化毛蚴時至少留取30g糞便，且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗（化學法），試驗前3日禁食肉類及含動物血食物并禁服鐵劑，維生素C等。所有糞便標本采集后1小時內(nèi)應檢查完畢，以防止有形成分受消化酶及pH的破壞。
D、腦脊液樣本
腦脊液標本采集后立即送檢，放置過久將影響檢驗結果：如細胞變性，破壞，導致計數(shù)和分類不準；有些化學物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少；細菌發(fā)生自溶影響細菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個無菌管，第一管作細菌培養(yǎng)，第二管作化學分析和免疫學檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查，三管的順序不宜顛倒。因標本采集較難，全部送檢和檢測過程應注意安全。
E、胸腹水樣本
與腦脊液標本一樣，采集后的標本注意安全，及時送檢。一般也分裝三管，一管作常規(guī)細胞學檢查，一管生化檢查，一管細菌培養(yǎng)，順序以與腦脊液相同為宜。
F、前列腺液樣本
前列腺液標本由前列腺按摩后采集，液量少時直接滴在載玻片上及時送檢，須注意防止標本蒸干，量多時收集在潔凈干燥的試管中。若按摩不出前列腺液，可檢查按摩后的尿液沉渣。
G、精液樣本
精液標本采集前應禁欲3~7天，排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時送檢。由于精子生成日間變動較大，一般應檢查2~3次（每次間隔1~2周）方可做診斷。
H、陰道分泌物樣本
陰道標本采集前24小時應禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等，取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材，制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標本，經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標本。
液體類標本：
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1、血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2、血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3、尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4、細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5、組織標本：
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。標本融化后仍然保�?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
利用ELISA進行臨床檢驗常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。
A、血液樣本
有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應在標本上注明該因素。
1．外周血
一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對燒傷病人，可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規(guī)檢測（如白細胞計數(shù)、分類等）受生理因素影響波動過大，比較時宜使條件盡量一致。涉及到體內(nèi)出、凝血功能的檢測項目（如血小板計數(shù)，出血時間或凝血時間等）的檢測，一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物，以便在減少或避免干擾因素的影響。
2．靜脈血
除涉及各種止血和血栓檢測等項目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數(shù)檢測項目的分析檢測可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測項目中，有些（如血糖，血脂等）受飲食及晝夜因素影響較大，一般以清晨空腹血標本為宜；有些在血中衰變較快（血清酶活性測定如ACP活性等），0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項目的檢測必須及時而快速；有些（如肌酸激酶等）受運動等因素影響較大。抽血時避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀，LDH等的測定。
B、尿液樣本
同血標本一樣，尿液標本受飲食、運動、藥物量等因素的影響也較大，特別是飲食的影響，故一般來說晨尿優(yōu)于隨機尿。晨尿是指清晨起床后的第一次尿標本，較濃縮和酸化，有形成分（如血細胞，上皮細胞，管形）相對集中便于觀察。隨機尿即隨意一次尿，留取方便，但受飲食、運動、藥物影響較甚，易于出現(xiàn)假陽性和假陰性結果，如飲食性蛋白尿，飲食性糖尿，維生素C干擾潛血結果等。餐后尿（午餐后2小時收集的患者尿液）適用于尿糖，尿蛋白和尿膽原的檢查，此時的尿標本可增加試驗敏感性，檢出較輕微的病變。12小時尿細胞計數(shù)即Addis計數(shù)（前晚8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液），因時間較長，細菌易繁殖，須加入防腐劑甲醛。24小時尿（第一天晨8時排空膀胱后留取至次日晨8時的所有尿液）中化學物質(zhì)的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羥類固醇，兒茶酚胺，Ca2+等，檢測不同的物質(zhì)，選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細菌培養(yǎng)，要求無菌，沖洗外陰后留取標本。所有尿標本的收集都應足量，*少12 ml，*好50 ml，定時尿須全部收集，對女性患者應避免陰道分泌物、經(jīng)血污染尿標本。
C、糞便樣本
糞便標本的檢測對判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價值。采集時要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便，對外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。找寄生蟲蟲體及作蟲卵計數(shù)應收集24小時糞便。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應于排便后立即檢查，從有膿血和稀軟處取材，保溫送檢。查日本血吸蟲蟲卵時應取粘液、膿血部分，孵化毛蚴時至少留取30g糞便，且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12時或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗（化學法），試驗前3日禁食肉類及含動物血食物并禁服鐵劑，維生素C等。所有糞便標本采集后1小時內(nèi)應檢查完畢，以防止有形成分受消化酶及pH的破壞。
D、腦脊液樣本
腦脊液標本采集后立即送檢，放置過久將影響檢驗結果：如細胞變性，破壞，導致計數(shù)和分類不準；有些化學物質(zhì)如葡萄糖等將分解含量減少；細菌發(fā)生自溶影響細菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個無菌管，第一管作細菌培養(yǎng)，第二管作化學分析和免疫學檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查，三管的順序不宜顛倒。因標本采集較難，全部送檢和檢測過程應注意安全。
E、胸腹水樣本
與腦脊液標本一樣，采集后的標本注意安全，及時送檢。一般也分裝三管，一管作常規(guī)細胞學檢查，一管生化檢查，一管細菌培養(yǎng)，順序以與腦脊液相同為宜。
F、前列腺液樣本
前列腺液標本由前列腺按摩后采集，液量少時直接滴在載玻片上及時送檢，須注意防止標本蒸干，量多時收集在潔凈干燥的試管中。若按摩不出前列腺液，可檢查按摩后的尿液沉渣。
G、精液樣本
精液標本采集前應禁欲3~7天，排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時送檢。由于精子生成日間變動較大，一般應檢查2~3次（每次間隔1~2周）方可做診斷。
H、陰道分泌物樣本
陰道標本采集前24小時應禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等，取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材，制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標本，經(jīng)期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標本。
液體類標本：
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1、血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2、血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3、尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4、細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5、組織標本：
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。標本融化后仍然保�?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
