本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關液體樣本中血管內皮生長因子（VEGF)含量。 實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠血管內皮生長因子（VEGF)水平。用純化的小鼠血管內皮生長因子（VEGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入小鼠血管內皮生長因子（VEGF)，再與HRP標記的血管內皮生長因子（VEGF)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內皮生長因子（VEGF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠血管內皮生長因子（VEGF)濃度。
試劑盒組成：
| 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | |
| 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | |
| 密封袋 | 1個 | 1個 | |
| 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
| 標準品：270 ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。標本融化后仍然保�?/font>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L ，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/L，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間*好控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，*好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋
倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990以上。
2.批內與批間應分別小于9%和11%
檢測范圍：
10ng/L -200ng/L
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
標簽：試劑盒
1、Haijun Liu,Shencun Fang,Wei Wang,etc.Macrophage-derived MCPIP1 mediates silica-induced pulmonary fibrosis via autophagy[J].Part Fibre Toxicol.2016:1-17.
作者單位：東南大學
使用產(chǎn)品：Human MCP-1, TNF-α, TGF-β ELISA kit
2、Juan Zhang,Meng Cao,Wenwen Yang,etc.Inhibition of Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase Could Enhance 1,4-Benzoquinone-Induced Oxidative Damage in K562 Cells[J].Oxid Med Cell Longev.2016:1-11.
作者單位：東南大學
使用產(chǎn)品：Human NADP, NADPH ELISA Kit
3、Qian-NanDi，Wei-XinCao，RunXu,etc.Chronic low-dose exposure of nonylphenol alters energy homeostasis in the reproductive system of female rats[J].Toxicology and Applied Pharmacology.2018,1(348):67-75.
作者單位：東南大學
使用產(chǎn)品：Rat E2 ELISA Kit
4、Muhammad Noman Khan,Bing Wang,Jing Wei,etc.CXCR1/2 antagonism with CXCL8/Interleukin-8 analogue CXCL8(3-72)K11R/G31P restricts lung cancer growth by inhibiting tumor cell proliferation and suppressing angiogenesis[J].Oncotarget.2015,6(25): 21315-21327.
作者單位：國立清華大學（臺灣）
使用產(chǎn)品：Human CXCL1, CXCL6, CXCL8 ELISA kit
5、Cheng Yu Wang,Xiang Dan Li,Zhi Hong Hao,etc.Insulin-like growth factor-1 improves diabetic cardiomyopathy through antioxidative and anti-inflammatory processes along with modulation of Akt/GSK-3β signaling in rats[J].Korean J Physiol Pharmacol.2016,20(6): 613-619.
作者單位：延邊大學
使用產(chǎn)品：Rat IL-1β, TNF-a ELISA kit
6、Xiaoyue Shen,Wenkui Sun,Yi Shi,etc.Altered Viral Replication and Cell Responses by Inserting MicroRNA Recognition Element into PB1 in Pandemic Influenza A Virus (H1N1) 2009[J].Mediators Inflamm.2015:1-12.
作者單位：南京大學
使用產(chǎn)品：Human IL-6 ELISA kit
7、Chun‐Tao Lei,Hua Su,Chen Ye,etc.The classic signalling and trans-signalling of interleukin‐6 are both injurious in podocyte under high glucose exposure[J].J Cell Mol Med.2018,22(1):251-260.
作者單位：華中科技大學
使用產(chǎn)品：Human sIL‐6R, sgp130 ELISA kit
8、Jian’an Bai,He Na,Xiumei Hua,etc.A retrospective study of NENs and miR-224 promotes apoptosis of BON-1 cells by targeting PCSK9 inhibition[J].Oncotarget.2017,8(4): 6929-6939.
作者單位：南京醫(yī)科大學附屬逸夫醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Human glucocorticoid ELISA kit
9、Zhan Zhang, Di Wang,Shanlei Qiao,etc.Metabolic and microbial signatures in rat hepatocellular carcinoma treated with caffeic acid and chlorogenic acid[J].Scientific reports.2017(7):1-10.
作者單位：南京醫(yī)科大學
使用產(chǎn)品：Rat LPS ELISA kit
10、Meng-Chen Lu,Jian-Ai Ji,Yong-Lin Jiang,etc.An inhibitor of the Keap1-Nrf2 protein-protein interaction protects NCM460 colonic cells and alleviates experimental colitis[J].Scientific reports. 2016(6):1-13.
作者單位：中國藥科大學
使用產(chǎn)品：Human IL-1β, IL-6, TNF-α, IFN-γELISA kit
11、Xiaotong Sun,Jing Wei,Yawei Tang,etc.Leptin-induced migration and angiogenesis in rheumatoid arthritis is mediated by reactive oxygen species[J].FEBS Open Bio.2017,7(12):1899-1908.
作者單位：大連醫(yī)科大學
使用產(chǎn)品：Human VEGF, IL‐1β, TNF-α ELISA kit
12、Geng Tian,Linlin Cheng,Xuewei Qi,etc.Transgenic Cotton Plants Expressing Double-stranded RNAs Target HMG-CoA Reductase (HMGR) Gene Inhibits the Growth, Development and Survival of Cotton Bollworms[J].Int J Biol Sci. 2015,11(11):1296-1305.
作者單位：華中農(nóng)業(yè)大學
使用產(chǎn)品：Plant HMGR ELISA kit
13、Siyuan Cui,Lili Men,Yu Li,etc.Selenoprotein S Attenuates Tumor Necrosis Factor-α-Induced Dysfunction in Endothelial Cells[J].Mediators Of Inflamm.2018:1-16.
作者單位：大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Human ICAM-1, VCAM-1 ELISA kit
14、Peng-Tao Ren,Yuan Zhang,etc.Comparative investigation of the effects of specific antigen-sensitized DC-CIK and DC-CTL cells against B16 melanoma tumor cells[J].Mol Med Rep. 2017,15(4):1533-1538.
作者單位：河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Human CCL19, CCL22 ELISA kit
15、Ming Ma,Lian-mei Zhao,Xing-xiao Yang,etc.p-Hydroxylcinnamaldehyde induces the differentiation of oesophageal carcinoma cells via the cAMP-RhoA-MAPK signalling pathway[J].Scientific reports.2016(6):1-13.
作者單位：河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Human cAMP, CEA, SCC ELISA kit
16、Yucai Chen,Tianyi Yuan,Huifang Zhang,etc.Activation of Nrf2 Attenuates Pulmonary Vascular Remodeling via Inhibiting Endothelial-to-Mesenchymal Transition: an Insight from a Plant Polyphenol[J].Int J Biol Sci.2017,13(8):1067-1081.
作者單位：中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學藥物研究所
使用產(chǎn)品：Human MDA ELISA kit
17、Rao Sun,Zuoxia Zhang,Yishan Lei,etc.Hippocampal activation of microglia may underlie the shared neurobiology of comorbid posttraumatic stress disorder and chronic pain[J].Mol Pain. 2016(12):1-13.
作者單位：南京大學醫(yī)學院鼓樓醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Human IL-1β, TNF-α ELISA kit
18、Yuanyuan Zhuang,Jiabao Liu,Pei Ma,etc.Tamarixinin A Alleviates Joint Destruction of Rheumatoid Arthritis by Blockade of MAPK and NF-κB Activation[J].Front Pharmacol.2017(8):1-11.
作者單位：北京協(xié)和醫(yī)學院
使用產(chǎn)品：Mouse CII antibody ELISA kit
19、Huawen Shi,Guangchao Yang,Tongsen Zheng,etc.A preliminary study of ALPPS procedure in a rat model[J].Scientific reports. 2015(5):1-12.
作者單位：哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Rat NF-KB ELISA kit
20、Bo Qiu,Ming Gong,Qi-Ting He,etc.Controlled Release of Interleukin-1 Receptor Antagonist from Hyaluronic Acid-Chitosan Microspheres Attenuates Interleukin-1β-Induced Inflammation and Apoptosis in Chondrocytes[J].Biomed Res Int.2016:1-12.
作者單位：武漢大學人民醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Rat GAG ELISA kit
21、Gairu Li,Yang Xiang,Jin Zhao,etc.Saccharum Alhagi polysaccharide-1 and -2 promote the immunocompetence of RAW264.7 macrophages in vitro[J].Exp Ther Med.2018,15(4): 3556-3562.
作者單位：新疆醫(yī)科大學
使用產(chǎn)品：Mouse IL-2, IL-1β, TNF-α ELISA kit
22、Yuanyuan Zhang,Minhui Sun,Yuwei Han,etc.The saponin DT-13 Attenuates Tumor Necrosis Factor-α-induced Vascular Inflammation Associated with Src/NF-кB/MAPK Pathway Modulation[J].Int J Biol Sci.2015,11(8):970-981.
作者單位：中國藥科大學
使用產(chǎn)品：Mouse ICAM-1 (sICAM-1), VCAM-1 (sVCAM-1) ELISA kit
23、Ying Huang,Shaofeng Wang,Chunya Zhang,etc.Experimental study of the anti-atherosclerotic effect of demethylzeylasteral[J].Exp Ther Med.2017,13(6): 2787-2792.
作者單位：上海市人民醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Rabbit anti-oxidized LDL (ox-LDL) antibody ELISA kit
24、Lin Li,Ting Xiao,Fang Li,etc.Hydrogen sulfide reduced renal tissue fibrosis by regulating autophagy in diabetic rats[J].Mol Med Rep.2017,16(2): 1715-1722.
作者單位：華南大學第一附屬醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Rat UP ELISA kit
25、Yong Zhang,Changyin Li,Hu Li,etc.miR-378 Activates the Pyruvate-PEP Futile Cycle and Enhances Lipolysis to Ameliorate Obesity in Mice[J].EBioMedicine.2016(5): 93-104.
作者單位：中國醫(yī)學科學院
使用產(chǎn)品：Mouse Insulin, FFA ELISA kit
26、Haitao Zou,Ruixue Su,Jing Ruan,etc.Toll-like receptor 3 pathway restricts Marek’s disease virus infection[J].Oncotarget.2017,8(41):70847-70853.
作者單位：揚州大學
使用產(chǎn)品：Chicken IFN-β ELISA kit
27、Na Yang,Run-bin Sun,Xing-long Chen,etc.In vitro assessment of the glucose-lowering effects of berberrubine-9-O-β-D-glucuronide,an active metabolite of berberrubine[J].Acta Pharmacol Sin.2017,38(3): 351-361.
作者單位：中國藥科大學
使用產(chǎn)品：Rat α- glucosidase ELISA kit
28、Xiaoxiao Qian,Juan Tan,Ling Liu,etc.MicroRNA-134-5p promotes high glucose-induced podocyte apoptosis by targeting bcl-2[J].Am J Transl Res.2018,10(3): 989-997.
作者單位：南京醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院
使用產(chǎn)品：Mouse microalbuminuria ELISA Kit
29、Ruiping Fan,Yuwei Han,Han Han,etc.DT-13 ameliorates TNF-α-induced nitric oxide production in the endothelium in vivo and in vitro[J].Biochemical and Biophysical Research Communications.2018,1(495):1175-1181.
作者單位：中國藥科大學
使用產(chǎn)品：Mouse nitric oxide, IL-8, MCP-1, ROS, TNFR ELISA kit
30、Yu Li,Ning Hao,Suping Zou,etc.Immune Regulation of RAW264.7 Cells In Vitro by Flavonoids from Astragalus complanatus via Activating the NF-κB Signalling Pathway[J].Journal of Immunology Research.2018:1-9.
作者單位：安徽農(nóng)業(yè)大學
使用產(chǎn)品：Mouse IL-1β, IL-6, TNF-α, NO ELISA Kit
31、Xichun Wang,Shibin Feng,Nana Ding,etc.Anti-Inflammatory Effects of Berberine Hydrochloride in an LPS-Induced Murine Model of Mastitis[J].Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine,2018:1-9.
作者單位：安徽農(nóng)業(yè)大學
使用產(chǎn)品：Mouse TNF-α, IL-6, and IL-1β ELISA Kit
32、JieChao,YanLv,JinChen,etc.SiO2-induced release of sVEGFRs from pulmonary macrophages[J].Respiratory Physiology & Neurobiology,2018(247):1-8.
作者單位：東南大學
使用產(chǎn)品：Human sVEGFR ELISA Kit
33、Meng-Chen Lu, Qiong Jiao,Tian Liu,etc.Discovery of a head-to-tail cyclic peptide as the Keap1-Nrf2 protein-protein interaction inhibitor with high cell potency[J].European Journal of Medicinal Chemistry.2018,1(143):1578-1589.
作者單位：中國藥科大學
使用產(chǎn)品：Mouse IL-1β, IL-18, TNF-α ELISA Kit
34、Zhengfeng Wu,Tianhong Gao,Ronglign Zhong,etc.Antihyperlipidaemic effect of triterpenic acid-enriched fraction from Cyclocarya paliurus leaves in hyperlipidaemic rats[J].Pharmaceutical Biology,2017,1(55):712-721.
作者單位：中國藥科大學
使用產(chǎn)品：Rat apoB48 ELISA Kit
35、Rao Sun,Zhibin Zhao,Jiying Feng,etc.Glucocorticoid-Potentiated Spinal Microglia Activation Contributes to Preoperative Anxiety-Induced Postoperative Hyperalgesia[J].Mol Neurobiol.2017,54(6):4316-4328.
作者單位：南京鼓樓醫(yī)院
使用產(chǎn)品： Rat CS, IL-1β, TNF-α ELISA Kit
36、Guoxiang You, Peifang Wang, Jun Hou,etc.Insights into the short-term effects of CeO2 nanoparticles on sludge dewatering and related mechanism[J].Water Research.2017,04(011):93-113.
作者單位：河海大學
使用產(chǎn)品：Plant LAP ELISA Kit
37、Peifang Wang, Guoxiang You, Jun Hou,etc.Responses of wastewater biofilms to chronic CeO2 nanoparticles exposure: Structural, physicochemical and microbial properties and potential mechanism[J].Water Research.2018:208-217.
作者單位：河海大學
使用產(chǎn)品：Plant AHL ELISA Kit
38、Yi Xu, Chao Wang, Jun Hou,etc.Strategies and relative mechanisms to attenuate the bioaccumulation and biotoxicity of ceria nanoparticles in wastewater biofilms[J].Bioresource Technology.2018:102-109.
作者單位：河海大學
使用產(chǎn)品：Plant ATP, DHA ELISA Kit
39、Junsheng Liu,Zhennan Gu,Wenwei Lu,etc.Multiple mechanisms applied by Lactobacillus pentosus AT6 to mute the lethal effects of Salmonella in a mouse model[J].Food Funct.2018, 23;9(5):2787-2795.
作者單位：江南大學
使用產(chǎn)品：Mouse CRP, LPS ELISA Kit
